La trypsine de recombinaison pour la digestion de protéine de culture cellulaire dissocient la trypsine de cellules de tissu
Trypsine de recombinaison
Description
Trypsine
Nombre de (EC) de la Commission d'enzymes : 3.4.21.4
Poids moléculaire : kDa 23,3 (porcin)
Coefficient d'extinction : E1% = 12,9 - 15,4 (280 nanomètre)
pi : 10,1 - 10,5(porcin)
Trypsinogen
Poids moléculaire : 24 kDa (porcins)
Coefficient d'extinction : E1% = 14,4 (280 nanomètre)
pi : 9,3 (porcin)
Procédure
Introduisez à la pipette (dans les millilitres) les réactifs suivants dans les cuvettes appropriées de quartz :
| | Examinez | Masquez |
| Réactif B (BAEE) | 3,00 | 3,00 |
Équilibrent au moniteur de 25 °C.A253nm jusqu'à la constante, utilisant un spectrophotomètre convenablement thermostatted. Ajoutez alors :
| | Examinez | Masquez |
| Réactif C (HCL) | ---- | 0,20 |
| Réactif D (solution d'enzymes) | 0,20 | ---- |
Mélangez immédiatement par inversion et enregistrez l'augmentation d'A253nm pendant approximativement 5 minutes. Obtenez le ΔA253nm/minute utilisant le taux linéaire maximum pour l'essai et le masquez.
Calcul
| Enzyme de BAEE Units/ml = | (Essaide ΔA253nm/min - blancde ΔA253nm/min) (DF) |
| (0,001) (0,20) |
DF = facteur de dilution
0,001 = le changement d'A253nm/minute par unité de trypsine à pH 7,6 au °C 25 dans un mélange de réaction de 3,2 ml
0,20 = volume (dans les millilitres) d'enzyme utilisés
| Solid= d'Units/mg | enzyme d'units/ml |
| enzyme du magnésium solid/ml |
Avantages
Origine animale libre : L'utilisation de la trypsine porcine de recombinaison élimine le risque de présence de virus, et d'autres agents adventices potentiels ont trouvé en trypsine animal-dérivée.
Stablility : Une poudre lyophilisée par trypsine de recombinaison stérile élimine les risques de contamination et diminue la possibilité de la perte d'activité en cours de transport et stockage.
Grande pureté :
1) la trypsine porcine de recombinaison fournit l'activité spécifique accrue et élimine souiller des activités de protéases trouvées en enzymes extraites.
2) De pas autres protéases de contamination telles que la chymotrypsine ou le carboxypeptidase A.
Application
Employez la trypsine de recombinaison, la catégorie de Proteomics, pour digérer spécifiquement des protéines séparées par la 2D électrophorèse de gel ou les méthodes chromatographiques liquides pendant la préparation témoin pour la spectrométrie de masse.
Recommandez l'utilisation
Préparez 1-10mg/ml la trypsine que de recombinaison avec le rapport de 1mM HCl.The à la protéine visée est 1h50 au 1:1000 (w/w). L'optimum pH est pH7-10.
